ОЦЕНКА ТОКСИЧНОСТИ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОЙ ДОБАВКИ АБИОТОНИК | Опубликовать статью ВАК, elibrary (НЭБ)

ОЦЕНКА ТОКСИЧНОСТИ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОЙ ДОБАВКИ АБИОТОНИК

Научная статья

Шантыз А.Х.¹, Дельцов А. А.², Марченко Е.Ю.^3,*, Шантыз А.Ю.⁴

¹ORCID: 0000-0001-6514-3510;

³ORCID: 0000-0002-1529-9039;

^{1, 3, 4} Кубанский государственный аграрный университет, Краснодар, Россия;

² Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии – МВА имени К.И. Скрябина, Москва, Россия

*Корреспондирующий автор (superbananahead[at]mail.ru)

Аннотация

В данной статье приведены результаты исследования параметров токсичности биологически активной добавки для ветеринарного применения абиотоник на белых беспородных крысах, белых нелинейных мышах и кроликах породы «советская шиншилла». Результаты исследований показали, что кормовая добавка абиотоник относится к 4-му классу опасности в соответствии с нормативами ГОСТ 12.1.007-76 – вещества малоопасные, а также не обладает токсичностью при нанесении на слизистые оболочки и кожу и не обладает аллергенными и кожно-резорбтивными свойствами.

Ключевые слова: токсикологическое исследование, лабораторные животные, кормовая добавка, летальная доза.

EVALUATION OF THE TOXICITY OF THE BIOLOGICALLY ACTIVE ADDITIVE OF ABIOTONIC

Research article

Shantiz A. Kh.¹, Del’cov A. A.², Marchenko E. Yu.³*, Shantiz A. Y.⁴

¹ORCID: 0000-0001-6514-3510;

³ORCID: 0000-0002-1529-9039;

^{1, 3, 4} Kuban State Agrarian University, Krasnodar, Russia;

²Moscow State Academy of Veterinary Medicine and Biotechnology – MVA named after K.I. Skryabin, Moscow, Russia

*Corresponding author (superbananahead[at]mail.ru)

Abstract

This article presents the results of a study of the toxicity parameters of biologically active additive for veterinary use a Abiotonic in white laboratory rats and white laboratory mice and rabbits of breed «Soviet chinchilla». The results of our studies showed that the feed additive belongs to the 4th hazard class in accordance with the standards of GOST 12.1.007-76 – low-hazard substances, and also doesn’t have toxicity when applied to mucous membranes and skin and doesn’t have allergenic and skin-resorptive properties.

Keywords: toxicological research, laboratory animals, letal dose, feed additive.

Введение

Одной из важнейших задач, стоящих перед специалистами в области животноводства, является сохранение высокого уровня продуктивности у сельскохозяйственных животных [9].

Несбалансированность рациона высокопродуктивных животных по комплексу питательных веществ в настоящее время является сдерживающим фактором развития животноводства [4].

Максимальный потенциал организма продуктивных животных может быть достигнут только при наличии полноценного кормления, сбалансированного не только по белкам, жирам и углеводам, но и по микроэлементам, макроэлементам, витаминам и аминокислотам. Основные рационы сельскохозяйственных животных – растительного происхождения, следовательно, они не могут обеспечить высокопродуктивных животных в полноценном белке, в том числе и в незаменимых аминокислотах [2], [3].

Недостаточное поступление белковых компонентов в организм приводит к различным патологиям. В таких случаях, для восстановления нарушенных функций, будет необходимо обеспечение организма всеми необходимыми питательными веществами [1], [10].

Чтобы избежать проблем с падением продуктивности у сельскохозяйственных животных, в нашей стране расширяется производство синтетических аминокислот, которые получают путем гидролиза и применяют в качестве добавок к рационам у высокопродуктивных животных [3].

К группе таких препаратов и кормовых добавок относится биологически активная добавка абиотоник производитель ООО фирма А-БИО (г. Москва, РФ).

В связи с этим, было решено провести точную токсикологическую оценку новой кормовой добавки абиотоник для исследования возможных неблагополучных последствий для организма животных.

Методы и материалы исследования

Объект исследования – кормовая добавка абиотоник, которая представляет собой раствор, в основе – гидролизат соевого белка средней степени расщепления с комплексом витаминов и микроэлементов.

В токсикологических экспериментах в общей сложности участвовало 80 белых лабораторных мышей, 120 белых беспородных крыс и 10 кроликов породы «Советская шиншилла».

Все исследования проводили согласно официальным методическим указаниям и регламентирующим документам [6], [8].

Для определения параметров острой токсичности, в экспериментах было задействовано 60 белых лабораторных мышей с массой тела 18-20 г и 60 белых беспородных крыс, массой тела 180-200 г.

Перед началом опыта, животные выдерживали голодную диету (12 часов для крыс и 6 часов для мышей), после чего проводилось взвешивание, и методом «случайных чисел», используя критерий массы тела (отклонения от среднего значения массы тела не превышали 10 %), подопытные животные были распределены на шесть равных групп в каждой 10 голов. Из них 5 групп опытных групп, им задавалась исследуемая кормовая добавка, 6-я – контрольная, которой вводили физиологический раствор.

Кормовую добавку вводили внутрижелудочно, с помощью металлических питательных трубок с шарообразным наконечником, утром, натощак. Было подобрано пять различных дозировок как для мышей, так и для крыс. При превышении максимально допустимого разового введения (1 мл для мышей и 5 мл для крыс), введение осуществляли повторно в течение суток с интервалом 4-6 часов.

В течении двух недель велось регулярное наблюдение за общим состоянием подопытных животных. Регистрировали общее клиническое состояние, следили за поведенческой реакцией, оценивали реакцию на раздражители, следили за потреблением воды и корма.

По окончанию эксперимента, для проведения патологоанатомического исследования, все животные были подвергнуты эвтаназии.

Расчёт параметров острой токсичности кормовой добавки проводили по учету смертности животных от вводимых доз изучаемого препарата (метод Литчфилда и Уилкоксона). Класс опасности препарата определяли согласно ГОСТ 12.1.007-76 [14].

Изучение раздражающих свойств кормовой добавки проводили методом конъюнктивальной пробы на 10 кроликах породы «Советская шиншилла». Кормовую добавку Абиотоник закапывали в конъюнктивальный мешок левого глаза с помощью травмобезопасной офтальмологической пипетки в дозе 2 капли. Правый глаз служил контролем, в него, по аналогии, тем же подопытным животным закапывали изотонический раствор натрия хлорида.

Состояние слизистых оболочек глаз фиксировали в течение 2-х суток. Результаты наблюдений фиксировали через 5 минут, 30 минут, 1, 3, 6, 24 и 48 часов. Оценивали степень гиперемии, отечность, состояние сосудов склеры и роговицы, ширину зрачка, состояние век.

Изучение местно-раздражающего действия кормовой добавки абиотоник проводили на 2-х группах белых беспородных крыс массой тела 180-200 г, по 10 животных в каждой (1 – опыт, 2 – контроль).

Выстригали волосяной покров и обезжиривали кожу, после чего на подготовленный участок площадью, равной 6 см² подопытным животным наносили кормовую добавку абиотоник, а контрольным аналогичным способом дистиллированную воду. Наличие раздражающего действия определяли по возникновению эритемы или отека, утолщения кожной складки, расчесов на месте нанесения, трещин кожи, корок и геморрагий. По реакции животных, пальпацией определяли болезненность участка аппликаций.

Кожно-резорбтивное действие кормовой добавки абиотоник проводили «пробирочным методом» по М.Н. Аргунову. Было сформировано по 2 группы белых лабораторных мышей массой тела 18-20 г, и белых беспородных крыс массой тела 180-200 г, по 10 голов в каждой. Хвосты подопытных животных опускали в пробирку кормовой добавкой для опытных групп и с дистиллированной водой для контрольных на 2/3 длины.

Реакцию фиксировали через 4 часа, после погружения хвоста в изучаемую добавку. Отмечали проявление местных изменений на коже хвоста в форме гиперемии, отека или некроза; уровень проявления интоксикации; изменение массы тела; число летальных исходов.

Изучение аллергизирующих свойств изучаемой кормовой добавки проводили с помощью метода накожных аппликаций. В опыте было задействовано 2 группы белых беспородных крыс весом от 180 до 200 г, по 10 голов в каждой. Первая служила опытом, вторая контролем. Кормовая добавка абиотоник наносилась многократными аппликациями на выстриженную кожу боковых поверхностей туловища животных площадью 6см² в соотношении 0,1 мл/см² ежедневно, в течение 20 дней. Оценку аллергенных свойств производили по развитию дерматита, отека кожи, гиперемии, эритемы в месте аппликации. Реакцию кожи учитывали по шкале оценки проб.

Результаты и их обсуждение

Результаты исследования острой токсичности кормовой добавки абиотоник на лабораторных животных представлены в таблице 1.

Таблица 1 – Результаты исследования острой токсичности кормовой добавки абиотоник

Группа	Вид животных	Количество животных	Объем введения, мл	Пало/Выжило
1	мыши	10	0,50	0/10
2	мыши	10	0,75	0/10
3	мыши	10	1,00	0/10
4	мыши	10	1,25	0/10
5	мыши	10	1,50	0/10
Контроль	мыши	10	1,50	0/10
1	крысы	10	5,0	0/10
2	крысы	10	7,5	0/10
3	крысы	10	10,0	0/10
4	крысы	10	12,5	0/10
5	крысы	10	15,0	0/10
Контроль	крысы	10	15,0	0/10

Полученные нами данные демонстрируют, что при введении кормовой добавки абиотоник, у данных видов лабораторных животных отсутствуют видимые признаки токсикоза. После введения указанной добавки было отмечено кратковременное угнетение мышей и крыс всех групп в течение 1-3х часов. У животных наблюдалась вялость и снижение активности, что связано со стрессом от насильственного введения больших доз изучаемого препарата. Удовлетворительным сохранялось общее состояние животных; реакция на внешние раздражители была адекватной; потребление воды и корма в пределах возрастных физиологических норм; акт дефекации и мочеиспускания без видимых изменений, характерных для данных видов животных; слизистые оболочки бледно-розовые; кожа эластичная, шерстный покров гладкий и блестящий. На протяжении всего эксперимента летальных случаев не зарегистрировано.

В связи с полученными данными, посчитать величины летальных доз ЛД₅₀ и ЛД₁₀₀, не представлось возможным. Максимально введенные дозировки для мышей и крыс соответствуют 375 000 Ед/кг витамина А и 15 000 мг/кг гидролизата растительного белка.

Согласно классификации, указанной в отраслевом стандарте [14], по степени воздействия на организм кормовую добавку абиотоник следует отнести к веществам малоопасным (4-й класс опасности).

При проведении патологоанатомического вскрытия явных изменений в строении органов выявлено не было. Массовые коэффициенты органов животных опытных групп не отличался от значений, полученных у контрольных групп, как у лабораторных мышей, так и у крыс. Макроскопическая характеристика органов соответствовала здоровому организму.

Раздражающие свойства кормовой добавки абиотоник при нанесении на слизистые оболочки изучали методом конъюнктивальных проб на кроликах. Анализ зафиксированных реакций проведения конъюнктивальной пробы не выявил отклонений в клиническом состоянии животных. В течение первых 2-5 минут наблюдалось учащенное моргание, которое по истечении указанного времени прошло самопроизвольно. Температура тела, частота пульса и дыхания оставались в пределах физиологической нормы. Изменений кровенаполнения конъюнктивы и состояния роговицы и век, наличия лакримации и выделений также не было отмечено. В связи с чем можно утверждать, что кормовая добавка не оказывает токсического воздействия на слизистые оболочки.

При изучении воздействия кормовой добавки на кожные покровы установлено, что абиотоник не выявил изменений кожи, изменений толщины кожной складки. Гиперемия сосудов и болезненность при пальпации не наблюдались, отечность, трещины, корки и геморрагии отсутствовали. Симптомы интоксикации не наблюдались, также не были зафиксированы летальные исходы при нанесении препарата на кожные покровы каждый день на протяжении 10 суток.

Результаты исследований аллергенных свойств кормовой добавки абиотоник представлены в таблице 2.

 

Таблица 2 – Аллергенные свойства кормовой добавки абиотоник

Группа	Срок наблюдения, сутки	Симптомы
		гиперемия	отек кожи	десквамация
Опыт	10 сутки	0/10	0/10	0/10
	14 сутки	0/10	0/10	0/10
	21 сутки	0/10	0/10	0/10
Контроль	10 сутки	0/10	0/10	0/10
	14 сутки	0/10	0/10	0/10
	21 сутки	0/10	0/10	0/10

 

На протяжении всего опыта, у животных опытной группы, не наблюдались явления гиперемии в месте сенсибилизации, отека кожи, десквамации эпителия. Полученные данные свидетельствуют об отсутствии аллергенных свойств кормовой добавки абиотоник.

Заключение

Исходя из результатов проведенных экспериментов, можно сделать следующие выводы.

Величина LD₅₀ кормовой добавки абиотоник для белых мышей и крыс составляет более 5000мг/кг (375 000 Ед/кг вит. А и 15 000 мг/кг гидролизата для белых крыс и мышей). Следовательно, согласно ГОСТ 12.1.007- 76 [6], кормовая добавка абиотоник относится к 4-му классу опасности – малоопасные вещества.

Кормовая добавка абиотоник не обладает токсичностью при нанесении на слизистые оболочки и кожные покровы; не обладает аллергенными и кожно-резорбтивными свойствами.

Конфликт интересов Не указан.

Conflict of Interest None declared.