Цитохимические показатели нейтрофилов крови и их корреляционные взаимосвязи с маркерами диффузного токсического зоба у беременных женщин | Алиева А.З., Эседова А.Э., Идрисова М.А., Махаева С.Н., Сейдалиева К.Л., Гаджиева М.Р., Саипова Р.Г.

Введение

«Метаболическое» направление в рамках акушерства и гинекологии развивается все более интенсивно. Изучение метаболических процессов вплоть до разбора их на молекулярном уровне в патогенезе осложнений у беременных вызывает особый интерес. Картина крови у беременных может служить наиболее ранним источником информации о сдвигах метаболических составляющих. В маточно-плацентарном комплексе присутствуют клетки как адаптивного, так и врожденного иммунитета. Среди них выделяют Т- и В-лимфоциты, антигенпрезентирующие, а также эффекторные клетки. Кроме того, здесь обнаруживаются компоненты неспе­ци­фической защиты, включая макрофаги и натуральные киллеры децидуальной оболочки [1, 2]. Анализ цитохимических особенностей нейтрофилов позволяет глубже исследовать молекулярные механизмы адаптивных и защитных реакций организма. Плацента, являясь зоной взаимодействия материнской и плодовой систем, служит местом реализации разнообразных процессов, включая метаболические, играющие ключевую роль в успешном течении беременности [3–5].

Нейтрофилы — это фагоцитирующие клетки, которые способны быстро реагировать в рамках противоинфекционной защиты организма. Очевидно, эти клетки выступают в роли тканевых фагоцитов, которые принимают участие в реакциях воспалительного характера. Роль лейкоцитов в воспалительных реакциях была выявлена и доказана еще в 1901 г. И.И. Мечниковым. Для обозначения функции лейкоцитов был выделен термин «внутрисосудистое воспаление» [6–8]. Множество крупномасштабных исследований, проведенных в XX и ХХI вв., доказали достоверность этой теории. Цель этой реакции — уничтожение инородного антигена, т. е. плода. Помимо этого, путем «утилизации» апоптотического материала она создает физиологическое окружение для нормального роста и развития плода [9]. Нейтрофилы и макрофаги выполняют ряд функций, направленных на защиту организма от инфекционных агентов и элиминацию антигенов. Однако функции этих клеток не ограничиваются участием в защитных и компенсаторных реакциях. Если рассматривать роль нейтрофилов в рамках изучаемой нами темы, следует указать, что ранее нами было установлено, что «в нейтрофилах периферической крови беременных с синдромом тиреотоксикоза найдены достоверные сдвиги содержания компонентов фагоцитарной защитной системы» [10], и можно предположить следующее: повышение уровня тиреоидных гормонов воспринимается нейтрофилами как вторжение чужеродных антигенов, и в ответ на это нейтрофилы включают свои механизмы фагоцитоза, которые приводят к деградации [11, 12]. Повышенная концентрация тиреоидных гормонов, а также заболевания щитовидной железы, протекающие с клиническими признаками некомпенсированного тиреотоксикоза (например, диффузный токсический зоб, ДТЗ), нередко приводят к осложнениям гестации и аномалиям развития плода. Согласно данным исследований, распространенность ДТЗ среди беременных составляет до 3,0%. Гормональный баланс щитовидной железы играет критическую роль в эмбриогенезе, и любые отклонения в ее функции — как количественные, так и качественные — могут негативно влиять на формирование плода, повышая риски самопроизвольного аборта и внутриутробной гибели плода [13, 14]. В современной литературе вопросам изучения ферментной активности нейтрофилов и их корреляционным взаимо-связям с маркерами ДТЗ у беременных женщин уделяется не много внимания, что и послужило целью данного исследования.

Цель исследования: изучить степень изменения цитохимической активности нейтрофилов крови и их корреляционные взаимосвязи с маркерами ДТЗ у беременных женщин.

Материал и методы

В ходе исследования было проведено комплексное обследование 103 женщин, включая 78 беременных, находящихся на различных сроках гестации в ГБУ РД РКБ «Родильный дом № 3» с 2022 по 2024 г. Все пациентки подписали информированное согласие. Исследование одобрено этическим комитетом ФГБОУ ВО ДГМУ Мин­здрава России (протокол № 7 от 15.02.2022). Пациентки наблюдались всю беременность после постановки на учет в женской консультации по месту жительства, при поступлении в родильный дом № 3, а также в послеродовой период в поликлинике по месту жительства. Первую группу составили 27 беременных, у которых ДТЗ диа­гностировали до беременности или в совсем ранние сроки беременности и которые получали тиреостатики (пропилтиоурацил, тиамазол). Во 2-ю группу вошли 26 пациенток с ДТЗ, выявленным после I триместра, с субклиническим тиреотоксикозом без тиреостатической терапии и находившихся под наблюдением. Группа сравнения состояла из 25 женщин с физиологически протекающей беременностью в сроки гестации 20–39 недель без патологии щитовидной железы. В контрольную группу вошли 25 здоровых женщин того же возраста, что и обследованные, которые являлись донорами станции переливания крови.

Критерии включения в исследование: наличие беременности, установленный диагноз ДТЗ, возраст от 20 до 40 лет. Критерии исключения из исследования: невыполнение указаний экспериментатора по вопросам обследования или лечения, развитие побочных или токсических явлений, наличие возрастных ограничений, отказ пациентки, непредусмотренные факторы, возникающие в ходе исследования и исключающие обследование и лечение (выписка пациентки по срочным обстоятельствам и др.).

Кровь для исследования отбиралась утром натощак в объеме 4–5 мл. Все цитохимические и иммунологические показатели исследовали в зависимости от выбранных групп пациенток. В 1-й группе кровь отбиралась до беременности или в ее ранние сроки (I триместр) после установления диагноза до начала лечения и после проводимого лечения у беременных во II триместре. Во 2-й группе кровь отбиралась после I триместра беременности при установлении диа­гноза и во II триместре. Группа сравнения исследовалась в эти же временные промежутки.

Все беременные женщины, участвовавшие в исследовании, проходили стандартный комплекс диа­гностических процедур, включающий сбор медицинского анамнеза, общий и акушерский осмотр, биохимический анализ крови и ультразвуковое исследование (УЗИ) для оценки состояния плода и щитовидной железы (ЩЖ). Функциональная активность ЩЖ оценивалась посредством определения концентрации в сыворотке крови свободных фракций тироксина (Т4) и трийодтиронина (Т3), тирео-тропного гормона (ТТГ), а также аутоантител к рецептору тиреотропного гормона (АТ-рТТГ), тиреопероксидазе и тиреоглобулину. Активность миелопероксидазы (МПО) определялась методом Грэхэм — Кнолля с визуализацией в виде золотисто-коричневых гранулярных включений. Содержание катионных белков (КБ) исследовалось по методике В.Е. Пигаревского с использованием прочного зеленого, что позволяет оценить антимикробный потенциал организма. Уровень гликогена определялся с помощью ШИК-реакции (метод MacManus). Концентрация липидов анализировалась по методу Sheеhan. Средний цитохимический показатель (СЦП) выводится на основании подсчета 100 клеток по формуле Кеплоу в модификации Астальди и Верги, в условных единицах (у. е.). Мазки крови делались следующим образом: тонкие мазки из лейкомассы высушивали на воздухе не менее 40–60 мин и фиксировали в свежеприготовленном спирт-формоле (9:1), затем после промывки проточной водой мазки инкубировали в среде, содержащей 2–5 мл насыщенного при комнатной температуре раствора бензидина в трис-буфере (рН 7,2), 2,5 мл дистиллированной воды и 1 мл перекиси водорода (0,03%) в течение 5 мин.

Статистическая обработка данных осуществлялась в программе SPSS 6.0 с применением методов вариационной статистики. Распределение выборки — нормальное. Данные представлены в виде М±m. Достоверность различий оценивалась с помощью t-критерия Стьюдента, при этом статистически значимыми считались различия при p<0,05. Коэффициент корреляции (r) вычислялся по формуле Пирсона.

Результаты исследования

У беременных в первой исследуемой группе с ДТЗ до проводимого лечения наблюдали снижение активности МПО в нейтрофильных гранулоцитах (НГ) (p<0,05). В препаратах лейкоцитарной массы отмечали увеличение количества клеток с низким уровнем продуктов реакции. СЦП составлял 0,95±0,04 у. е., при контроле — 1,56±0,05 у. е., в то же время параллельные исследования пациентов с ДТЗ, получавших консервативное лечение, показали, что при использовании тиреостатических препаратов, снижающих функцию щитовидной железы, активность МПО НГ демонстрировала тенденцию к увеличению, и к 3-й неделе лечения значения СЦП становились близкими к контрольным (1,56±0,05 у. е.). Прослеживается закономерность: чем выше исходная тяжесть заболевания, тем более устойчивы изменения и тем хуже они поддаются лечению. Во 2-й группе обследуемых было отмечено, что в мазках лейкомассы уменьшается доля клеток с высокой активностью и преобладают клетки с умеренной активностью фермента в цитоплазме НГ, а также выявляются клетки со следами продуктов реакции (СЦП 1,12±0,03 у. е.). У женщин контрольной группы распределение гранул, содержащих МПО в нейтрофилах, равномерное. По интенсивности цитохимической реакции удалось выделить три типа клеток: с сильной, умеренной и слабой активностью. Плотность расположения гранул во всех участках цитоплазмы умеренная (СЦП 1,56±0,05 у. е.). В мазках преобладающее большинство нейтрофилов с умеренной активностью, и лишь 3–8% клеток имеют насыщенную гранулами цитоплазму, примерно такое же количество со слабой активностью и участками разной степени выраженности. Активность МПО в нейтрофилах крови женщин с физиологическим течением беременности (группа сравнения) сходна с показателем в контрольной группе. Распределение ферментсодержащих азурофильных гранул в цитоплазме клеток равномерное, плотность их расположения в преобладающем большинстве клеток умеренная. Однако следует отметить, что в I триместре беременности количество нейтрофилов с высоким содержанием окрашенных гранул снижено и составляет 1–3%, что отражается на величине СЦП. В этой группе он составляет 1,41±0,05 у. е., при контроле — 1,56±0,05 у. е.

При окрашивании мазков на КБ в НГ у беременных из 1-й группы до проводимого лечения выявили статистически значимое увеличение активности фермента в НГ (СЦП 1,84±0,05 у. е.) по сравнению с показателями групп сравнения и контроля (p<0,05). У беременных данной группы как до, так и после проводимого лечения содержание КБ более выражено, с преобладанием диффузного окрашивания цитоплазмы клеток (СЦП 1,84±0,05 у. е. (p<0,05) при контрольных значениях — 1,62±0,09 у. е.). У пациенток 2-й группы наблюдалось статистически значимое повышение уровня КБ (СЦП 1,71±0,05 у. е.) по сравнению с контрольной группой (p<0,05). В мазках преобладали нейтрофилы с умеренно окрашенной грануляцией, количество которых превышало показатели как контрольной, так и сравнительной группы. У женщин группы контроля и группы сравнения цитохимическая картина КБ в НГ существенно не отличалась.

У беременных женщин из 1-й группы с ДТЗ до лечения при окрашивании на гликоген в мазках лейкомассы выявляются НГ с содержанием слабо окрашенного ШИК-положительного материала (СЦП 1,19±0,24 у. е.) и небольшое количество клеток с умеренной окраской. Обращает на себя внимание малое содержание или даже полное отсутствие окрашенного материала на периферии некоторых клеток. В мазках отсутствуют клетки насыщенных продуктами реакции, в силу чего степень достоверности снижения содержания гликогена, по сравнению с контролем, высокая (p<0,05). После проводимого лечения тиреостатиками к 3-й неделе просматривается тенденция к росту активности гликогена в НГ, имеет место заметный рост за счет увеличения количества клеток с умеренным и высоким содержанием ШИК-положительного материала. Во 2-й группе обследуемых превалировали клетки с умеренно окрашенной цитоплазмой ШИК-позитивного вещества. Отмечалось низкое содержание окрашенного вещества на периферии большинства НГ (СЦП 1,28±0,15 у. е.) при контроле СЦП — 1,37±0,8 у. е. В группах контроля и сравнения наблюдается равномерное распределение ШИК-положительного материала со слабо выраженной грануляцией.

Сдвиги в содержании липидов в НГ существенны у беременных с ДТЗ из 1-й группы обследуемых до проводимого лечения. Значительное количество НГ имеет слабо выраженный суданположительный материал, расположенный в виде отдельных островков. СЦП 1,17±0,14 у. е., при контроле СЦП — 1,42±0,12 у. е. Некоторые сдвиги в содержании липидов в НГ заметны у беременных с ДТЗ после проведенного лечения. Количество НГ с умеренным содержанием окрашенных продуктов повышается, соответственно отмечается рост количества клеток с высокой активностью суданположительного материала. СЦП 1,38±0,8 у. е. В НГ крови у женщин во 2-й группе при окрашивании на липиды суданом продукты черного цвета равномерно распределены по всей цитоплазме. Большая часть клеток имеет умеренное количество суданположительного материала. Гранулярный компонент слабо выражен. СЦП 1,28±0,15 у. е. При окрашивании крови контрольной и сравнительной групп суданом черным Б липиды равномерно распределены в виде гранул по всей цитоплазме. Лишь отдельные клетки демонстрировали зоны, свободные от окрашенного вещества.

При изучении корреляционных взаимосвязей между активностью МПО, гликогена и липидов НГ и уровнями маркеров ДТЗ (АТ-рТТГ, Т3, Т4, ТТГ) в 1-й группе обследуемых до проводимого лечения выявлена сильная отрицательная корреляционная взаимосвязь (r=-0,69), кроме показателя ТТГ, где просматривалась сильная положительная взаимосвязь, как и у КБ данной группе до лечения (r=0,7). После проведенного лечения в данной группе была отмечена обратно пропорциональная тенденция корреляции показателей. Во 2-й группеобследуемых при изучении корреляционных взаимо-связей между активностью МПО, гликогена и липидов НГ и уровнями маркеров ДТЗ (АТ-рТТГ, Т3, Т4, ТТГ) была выявлена умеренно отрицательная взаимосвязь (r=-0,5), в то время как показатели КБ и ТТГ имели умеренно положительную корреляционную взаимосвязь (r=0,5). Что касается группы сравнения и контроля, то тут корреляционные взаимосвязи между активностью МПО, КБ, гликогена и липидов НГ и уровнями маркеров ДТЗ (АТ-рТТГ, Т3, Т4, ТТГ) не наблюдались (r=0).

Обсуждение

Мы считаем, что выявленные в работе низкие показатели МПО у беременных, особенно выраженные при ДТЗ, по-видимому, обусловлены большими затратами фермента на «утилизацию» тироксина. И надо полагать, что это фрагмент компенсаторной реакции организма на чрезмерный рост содержания в крови тиреоидных гормонов и нацеленной на сохранение гомеостаза. Снижение активности МПО закономерно приводит к угнетению функциональной активности НГ, что подтверждается низкими цифрами содержания энергетического (гликоген) и пластического (липиды) компонентов процесса фагоцитоза. Следует отметить, что найденные в работе низкие показатели активности МПО, количества гликогена и липидов в НГ у беременных женщин с ДТЗ, особенно выраженные до проведения лечения, сочетались с высокими цифрами содержания КБ. Эти данные дают основание полагать, что КБ не принимают участия в деградации тиреоидных гормонов. Предполагается, что активность МПО может коррелировать с выраженностью тиреотоксикоза и уровнем АТ-рТТГ, что отражает степень активации иммунной системы. Повышенная активность МПО может указывать на более интенсивный воспалительный процесс в щитовидной железе, индуцированный аутоантителами. Эти изменения наиболее выражены при тиреотоксикозе и отражают компенсаторно-приспособительные реакции нейтрофильной системы в условиях гормонального дисбаланса. Обобщая полученные результаты, можно сделать вывод, что изучение цитохимических показателей НГ, входящих в их антимикробную систему деградации фагоцитов, тиреоидных гормонов у беременных женщин, а также их корреляционные взаимосвязи с маркерами ДТЗ оправдано в связи с малоизученностью данной проблемы, а также ее высокой распространенностью. Вне сомнения, оно особенно ценно при нередкой патологии — сочетании ДТЗ в период беременности и возможной микробной инфекции. При этом важно знание состояния неспе­ци­фической резистентности организма, критериями которого являются цитохимические показатели нейтрофильных лейкоцитов. Результаты исследования могут выявить потенциальные биомаркеры для оценки активности ДТЗ у беременных и прогнозирования риска осложнений. Более глубокое понимание патофизиологических механизмов, лежащих в основе ДТЗ в период беременности, позволит оптимизировать подходы к диа­гностике и лечению этого заболевания и поможет предотвратить осложнения во время беременности и родов.

Заключение

У беременных с ДТЗ до лечения наблюдается уменьшение показателей ферментной активности МПО, КБ, липидов и гликогена в нейтрофилах, а также повышение показателей КБ. Выявленные нарушения свидетельствуют о снижении клеточных резервов, направленных на уничтожение избыточного содержания тиреоидных гормонов у матери, что влечет за собой уменьшение неспе­ци­фической резистентности организма и оказывает неблагоприятное воздействие как на материнский организм, так и на плод. Прослеживаются выраженные корреляционные взаимо-связи между цитохимическими показателями нейтрофилов крови и маркерами ДТЗ у беременных женщин на разных сроках гестации до и после лечения, что отражает участие клеточной популяции лейкоцитов в иммунологическом аспекте ДТЗ. Результаты данного исследования помогут акушерам-гинекологам и клиницистам в подборе тактики лечения и ведения беременных с ДТЗ, для возможного предотвращения осложнений на протяжении всего периода гестации и родов.

Сведения об авторах:

Алиева Аида Запировна — ассистент кафед­ры акушерства и гинекологии педиатрического, стоматологического и медико-профилактического факультетов ФБОУ ВО ДГМУ Мин­здрава России; 367000, Россия, г. Махачкала, пл. Ленина, д. 1; ORCID iD 0000-0003-2525-2004

Эседова Асият Эседовна — д.м.н., профессор, заведующая кафедрой акушерства и гинекологии педиатрического, стоматологического и медико-профилактического факультетов ФБОУ ВО ДГМУ Мин­здрава России; 367000, Россия, г. Махачкала, пл. Ленина, д. 1; ORCID iD 0000-0002-9311-1791

Идрисова Муминат Абдусаламовна — к.м.н., доцент, заведующая учебной частью кафед­ры акушерства и гинекологии педиатрического, стоматологического и медико-профилактического факультетов ФБОУ ВО ДГМУ Мин­здрава России; 367000, Россия, г. Махачкала, пл. Ленина, д. 1; ORCID iD 1234-5678-9101-1121

Махаева Сагибат Нуралиевна — студентка 6-го курса лечебного факультета ФБОУ ВО ДГМУ Мин­здрава России; 367000, Россия, г. Махачкала, пл. Ленина, д. 1; ORCID iD 0009-0006-0374-9705

Сейдалиева Кира Лукмановна — студентка 6-го курса лечебного факультета ФБОУ ВО ДГМУ Мин­здрава России; 367000, Россия, г. Махачкала, пл. Ленина, д. 1; ORCID iD 0000-0002-4303-7546

Гаджиева Марьям Расуловна — студентка 5-го курса стоматологического факультета ФБОУ ВО ДГМУ Мин­здрава России; 367000, Россия, г. Махачкала, пл. Ленина, д. 1; ORCID iD 0009-0000-7526-6397

Саипова Раиса Гиланиевна — врач-терапевт ГБУ РД «Хасавюртовская центральная городская больница им. Р.П. Аскерханова»; 368000, Россия, г. Хасавюрт, ул. Алиева, д. 21; ORCID iD 0009-0001-6547-0690

Контактная информация: Сейдалиева Кира Лукмановна, e-mail: kira_se02@mail.ru

Прозрачность финансовой деятельности: никто из авторов не имеет финансовой заинтересованности в представленных материалах или методах.

Конфликт интересов отсутствует.

Статья поступила 15.05.2025.

Поступила после рецензирования 06.06.2025.

Принята в печать 30.06.2025.

About the authors:

Aida Z. Alieva — Assistant Professor of the Department of Obstetrics and Gynecology of the Pediatric, Dental and Preventive Medicine Faculties, Dagestan State Medical University; 1, Lenin sq., Makhachkala, 367000, Russian Federation; ORCID iD 0000-0003-2525-2004

Asiyat E. Esedova — Dr. Sc. (Med.), Professor, Head of the Department of Obstetrics and Gynecology of the Pediatric, Dental and Preventive Medicine Faculties, Dagestan State Medical University; 1, Lenin sq., Makhachkala, 367000, Russian Federation; ORCID iD 0000-0002-9311-1791

Muminat A. Idrisova — C. Sc. (Med.), Associate Professor, Head of the Department of Obstetrics and Gynecology of the Pediatric, Dental and Preventive Medicine Faculties, Dagestan State Medical University; 1, Lenin sq., Makhachkala, 367000, Russian Federation; ORCID iD 1234-5678-9101-1121

Sagibat N. Makhaeva — 6th-year student at the Faculty of Medicine, Dagestan State Medical University; 1, Lenin sq., Makhachkala, 367000, Russian Federation; ORCID iD 0009-0006-0374-9705

Kira L. Seidalieva — 6th-year student of the Faculty of Medicine, Dagestan State Medical University; 1, Lenin sq., Makhachkala, 367000, Russian Federation; ORCID iD 0000-0002-4303-7546

Maryam R. Gadzhieva — 5th-year student of the Faculty of Dentistry, Dagestan State Medical University; 1, Lenin sq., Makhachkala, 367000, Russian Federation; ORCID iD 0009-0000-7526-6397

Raisa G. Saipova — primary care physician, Khasavyurt Central City Hospital named after R.P. Askerkhanov; 21, Alieva str., Khasavyurt, 368000, Russian Federation; ORCID iD 0009-0001-6547-0690

Contact information: Kira L. Seidalieva, e-mail: kira_se02@mail.ru

Financial Disclosure: no authors have a financial or property interest in any material or method mentioned.

There is no conflict of interest.

Received 15.05.2025.

Revised 06.06.2025.

Accepted 30.06.2025.