Системная склеродермия (ССД) относится к аутоиммунным заболеваниям соединительной ткани. ССД развивается чаще у молодых женщин и ассоциируется с высокой заболеваемостью и смертностью [1]. К числу главных причин смертности при ССД относятся интерстициальное поражение легких (ИПЛ) и легочная артериальная гипертензия [2, 3]. Течение ИПЛ, ассоциированного с ССД, характеризуется большой вариабельностью. Поэтому выявление маркеров — предикторов прогрессирования ИПЛ, которые будут помогать идентифицировать больных, требующих более интенсивного мониторинга и лечения, имеет большое значение для врачей.
С-реактивный белок (СРБ) является острофазным реактантом, который используется как маркер инфекции и воспаления [4]. Известно, что СРБ синтезируется гепатоцитами в результате стимуляции интерлейкином-6. У больных ССД присутствуют повышенные уровни СРБ, которые ассоциируются с плохой выживаемостью. В недавнем канадском исследовании [5] было показано, что повышенные уровни СРБ встречаются у 25% больных и ассоциируются с диффузным вариантом ССД, небольшой длительностью заболевания и более тяжелым поражением кожи и легких. Среди российских пациентов с ССД повышенные уровни СРБ выявлены примерно в 50% случаев [6]. Уровни этого маркера были повышены почти у 50% японских пациентов с ССД [7, 8], однако в обоих исследованиях был небольшой размер выборки (40 пациентов). Чаще повышенные уровни СРБ отмечаются у больных с диффузной формой (ДФ) ССД и при уровне более 20 мг/л ассоциируются с плохой выживаемостью [5, 9, 10]. При артритах воспалительной этиологии также наблюдаются повышенные уровни СРБ [11, 12]. Механизмы, лежащие в основе ассоциации сывороточных уровней СРБ и ССД, не совсем ясны. Вместе с тем существует достаточное число исследований, указывающих на участие генетических факторов в регуляции уровня СРБ в сыворотке. Ряд больших ассоциативных исследований, включая полногеномные (GWAS), показал, что значительная часть индивидуальной вариабельности воспалительных биомаркеров, включая СРБ, генетически детерминирована [13, 14], однако данные исследований противоречивы. Установлено, что полиморфизм rs1205С>Т гена CRP был ассоциирован с уровнями СРБ. В исследовании Wypasek et al. [15] была показана связь минорного аллеля rs1205Т гена
с высокими уровнями СРБ среди больных со стенозом аортального клапана по сравнению с мажорным rs1205СС генотипом. В исследовании [12] было показано, что носительство минорного аллеля rs1205Т гена
ассоциировано с низкими уровнями СРБ среди белых американцев. Сходные результаты были получены ранее при исследовании трех независимых когорт [14]. Однако результаты, полученные при изучении другой большой европейской когорты (651 больной ССД), не подтвердили участия 4 полиморфизмов гена
в патогенезе ССД [16].
проверка гипотезы ассоциации уровней СРБ с клиническими и серологическими фенотипами ССД и возможной связи полиморфизма rs1205 гена
с предрасположенностью к ССД в русской когорте больных.
Уровни СРБ были определены в мг/л высокочувствительным иммунонефелометрическим методом (вчСРБ). Уровень СРБ >5 мг/л считали повышенным СРБ(+), а уровень СРБ до 5 мг/л — нормальным СРБн.
Содержание статьи
Генотипирование
У 90 больных и 104 практически здоровых неродственных субъектов (персонал института), сопоставимых по полу и возрасту, без симптомов или признаков любого аутоиммунного заболевания, были взяты образцы венозной крови. ДНК выделяли из свежих или замороженных образцов крови, используя набор «ПРОБА-ГС-ГЕНЕТИКА» НПО «ДНК-Технология» (Москва).
Полиморфизм rs1205 гена CRP изучали, используя аллель-специфическую полимеразную цепную реакцию в реальном времени. Дизайн праймеров и меченых зондов, их синтез и условия амплификации были разработаны в ЗАО «СИНТОЛ» (Москва). Исследование проведено с использованием амплификатора ДТ-96 (НПО «ДНК-Технология», Москва).
Статистический анализ
Клинические фенотипы представляли как дихотомические вариабельности. Нормальные распределения сравнивали с использованием дисперсионного анализа ANOVA post hoc или теста Стьюдента и представляли как среднее ± стандартное отклонение (М±δ). Уровень значимости р2. Анализ был выполнен с использованием пакета программ Statistica 6.0 (Stat Soft Inc, Tulsa, USA).
Исследование было одобрено этическим комитетом ФБГУ НИИР им. В.А. Насоновой, письменное информированное согласие было получено у всех пациентов.
Результаты исследования
Из 90 пациентов 87,0% (78) составляли женщины. Средний возраст пациентов составлял 49,4±12,6 года, средняя длительность заболевания — 11,1±9,0 лет. ДФ имели 51 (57%) больных, из них у 9 (18%) длительность заболевания была менее 3 лет. В группе больных с ЛФ сходная длительность заболевания была выявлена у 3 (8%). Фенотип ИПЛ(+) был диагностирован у 71 (79%) пациента, АТА(+) — у 50 (55%), АЦА(+) — у 13 (14%) пациентов соответственно. Анализ индивидуальных уровней СРБ показал выраженную вариабельность данного признака. Повышенные концентрации СРБ >5 мг/л были обнаружены у 39 (43%) пациентов, из них у 12 (31%) с ЛФ и у 27 (69%) с ДФ ССД.
В таблице 1 приведены базовые показатели клинических и серологических фенотипов изученной группы пациентов с ССД.
Обсуждение результатов
У 43% больных ССД в нашей выборке были выявлены повышенные уровни СРБ, которые чаще встречались у пациентов с ДФ ССД, небольшой продолжительностью заболевания (менее 3 лет) и наличием серопозитивных аутоантител к топоизомеразе I, что согласуется с рядом сходных исследований в Канаде, Америке и Японии. В канадском исследовании [5] у больных с ДФ ССД средний уровень СРБ был выше, чем у больных с ЛФ (р=0,016). Пациенты с ДФ, особенно с небольшой длительностью заболевания, чаще имели повышенные уровни СРБ, чем больные с большой длительностью ССД (р=0,041). Авторы не выявили корреляции уровней СРБ с уровнями специфических аутоантител. Также было установлено, что выживаемость больных с высокими уровнями СРБ была ниже, чем у больных с нормальными уровнями СРБ. В американской когорте GENISOS [18] достоверно повышенные уровни СРБ были обнаружены у 22% пациентов чаще с ДФ ССД (р=0,040) и среди пожилых больных (р=0,026), чем в контрольной группе. Длительность заболевания, наличие аутоантител не коррелировали с уровнями СРБ. Авторы впервые установили, что базовые значения СРБ могут являться предикторами прогрессирования ИПЛ. Одно из объяснений высоких уровней СРБ может быть связано с влиянием цитокинов, вызывающих повышенное воспаление при раннем начале ССД. При заболевании с большей длительностью нормальные уровни СРБ определяются в большей степени процессом фиброза легочной ткани. Известно, что СРБ является общим маркером воспаления и частью естественного иммунного ответа на системное воспаление в ответ на высвобождение цитокинов интерлейкина-6 (IL-6) и интерлейкина-1β (IL-1β) из поврежденной ткани после взаимодействия с рядом ядерных рецепторов. Ранее было показано, что уровни IL-6 коррелировали с уровнями СРБ (r=0,69) и, как полагают, на 48% могут объяснять вариации в уровнях СРБ [8]. Механизмы, лежащие в основе ассоциации между СРБ и ССД, особенно роль генетических факторов, остаются неясными. Ряд ассоциативных генетических исследований, включая полногеномные (GWAS), показали генетическую детерминированность уровней воспалительных маркеров, включая СРБ, при разных заболеваниях [11].
В настоящем исследовании мы показали участие генетических вариантов одного из частых полиморфизмов rs1205 C/T гена CRP в регуляции уровня СРБ у больных ССД.
При сравнении частот генотипов rs1205 полиморфизма между группой пациентов с уровнем СРБ >5 мг/л и группой СРБн нами была установлена достоверно повышенная частота генотипа дикого типа СС у пациентов с высоким уровнем СРБ по сравнению с альтернативной группой пациентов (р=0,022).
Носители минорного генотипа rs1205TT имели почти на 60% ниже уровень СРБ по сравнению с генотипом rs1205СС дикого типа (11,1±5,9 мг/л и 18,9±18,4 мг/л). Эти данные согласуются с результатами исследования Rhodos et al. [19], где снижение составило 40%, и исследования Ammitzboll et al. [20], где оно достигало 50%, однако Plant et al. [21] такой связи не обнаружили. Необходимо отметить, что указанные исследования были проведены на когортах больных с ревматоидным артритом. Сходные данные были получены на других популяциях больных c кардиоваскулярными заболеваниями [15, 22] и системной красной волчанкой [23].
Заключение
Таким образом, в нашей выборке были выявлены повышенные уровни СРБ, которые коррелировали с ДФ пациентов с небольшой продолжительностью заболевания и повышенными уровнями аутоантител к топоизомеразе I, которые могут являться маркерами — предикторами плохой выживаемости пациентов. Кроме того, мы подтвердили ассоциацию между минорным аллелем rs1205T гена CRP и сниженным уровнем СРБ в русской когорте больных ССД. Показано, что rs1205 полиморфизм гена CRP не связан с предрасположенностью к ССД в изученной когорте пациентов.
Наше исследование имеет ряд ограничений ввиду небольшой выборки пациентов с ССД. Для подтверждения полученных нами данных относительно связи уровней СРБ с полиморфизмом rs1205 гена CRP необходимо использовать другие полиморфизмы гена CRP и большие по размеру выборки пациентов из разных этнических популяций.
Информация с rmj.ru
Загрузка...
