Ассоциативная роль полиморфизма гена eNOS (4a/4b) в развитии артериальной гипертензии у больных ревматоидным артритом | Чернова А.А., Никулина С.Ю., Толстокорова Ю.А.

Введение

Ревматоидный артрит (РА) — аутоиммунное ревматическое заболевание, характеризующееся хроническим эрозивным артритом и системным поражением других тканей и органов [1]. Наиболее важное место занимают патологические изменения сердечно-сосудистой системы [2]. Кардиоваскулярный риск у пациентов с РА значительно увеличен по сравнению с общей популяцией [3, 4]. Установлено, что артериальная гипертензия (АГ) при РА имеет мультифакториальный генез, обусловленный результатом взаимодействия полигенной составляющей и факторов внешней среды [5]. Выявление различных факторов, которые могут ассоциироваться с развитием АГ у больных РА, представляет интерес для исследования.

Выбор полиморфизма гена в данном исследовании строился на генно-кандидатном подходе, основанном на функции гена в патогенезе заболевания [6]. Так, при обзоре литературных данных было выявлено, что в 2007 г. уже проводилось исследование с целью изучения влияния гена eNOS (4a/b) на восприимчивость к РА. В исследование включили 145 здоровых лиц и 190 пациентов с РА. Результаты показали, что наличие полиморфизма 4a/b гена eNOS может выступать в качестве фактора риска развития РА [7]. Позднее была выявлена взаимосвязь гена eNOS и развития ишемической болезни сердца и АГ [8, 9].

Однонуклеотидный полиморфизм (ОНП) 4а/b гена eNOS локализован на длинном плече 7 хромосомы, локус 7q36.1. Предполагаемым механизмом реализации действия полиморфизма является запуск пула воспалительных цитокинов, которые реализуют патогенетические особенности системного воспаления при РА, способствующие развитию ангиогенеза. Субклиническое воспаление, локализованное в сосудистой стенке, рассматривается как важное звено патогенеза АГ [10, 11].

Литературные данные о влиянии гена eNOS (4a/b) на развитие АГ у больных РА немногочисленны. Целью нашего исследования явилось изучение вклада полиморфизма гена eNOS (4a/4b) в развитие АГ у больных РА.

Материал и методы

Набор пациентов проводился в ревматологическом отделении КГБУЗ «КМКБ № 20 им. И.С. Берзона» (г. Красноярск). Было обследовано 143 больных РА. От всех пациентов было получено добровольное информированное согласие на участие в исследовании. Среди обследованных была выделена группа пациентов с РА без АГ (n=50; 35%) и группа пациентов с РА в ассоциации с АГ (n=93; 65%). Для каждой основной группы была сформирована контрольная группа. Здоровых добровольцев (n=151) без ревматических и сердечно-сосудистых заболеваний разделили на 2 контрольные группы, сопоставимые по возрасту и полу с основными группами: контрольная группа 1, служившая контролем для группы пациентов с РА и АГ, и контрольная группа 2, служившая контролем для группы пациентов с РА без АГ. Всем пациентам были проведены клинические, лабораторные, инструментальные исследования.

Молекулярно-генетическое исследование проводили на базе Российско-итальянской лаборатории медицинской генетики «MAGI» КрасГМУ и лаборатории молекулярно-генетических исследований терапевтических заболеваний НИИТПМ — филиала ИЦиГ СО РАН (г. Новосибирск). У всех обследуемых были взяты образцы венозной крови в количестве 5–10 мл. Выделение ДНК проводили стандартным фенол-хлороформным методом. Генотипирование по гену eNOS выполнялось методом ПЦР-ПДРФ анализа (полимеразная цепная реакция — полиморфизм длин рестрикционных фрагментов). ПЦР проводилась с набором праймеров к соответствующим районам генома. Продукты ПЦР анализировали электрофорезом в 4% полиакриламидном геле с последующим окрашиванием бромистым этидием.

Статистическая обработка данных проводилась с использованием пакета прикладных программ Excel, Statistica for Windows 10.0, IBM SPSS 20.

Различия в распределении частот аллелей и генотипов гена eNOs между группами оценивали посредством критерия χ². В случае четырехпольных таблиц сопряженности сравнение выборок по частотам генотипов и аллелей применяли точный двусторонний критерий Фишера. Относительный риск заболевания по конкретной аллели или генотипу вычисляли как отношение шансов (ОШ). ОШ указано с 95% доверительным интервалом (ДИ). Различия считали статистически значимыми при р<0,05.

Результаты и обсуждение

При распределении генотипов и аллелей полиморфизма гена eNOS наблюдается статистически значимое преобладание гомозиготного генотипа 4а/4a и аллели 4а в группе пациентов с РА в ассоциации с АГ в сравнении с лицами контрольной группы 1 (табл. 1).

Оцененный по отношению шансов риск развития РА в ассоциации с АГ у носителей генотипа 4а/4a гена eNOS выше в 3,635 раза (р<0,05) по сравнению с носителями генотипов 4a/4b и 4b/4b. Аллель 4а статистически значимо (p<0,05) чаще встречалась в группе пациентов с РА в ассоциации с АГ, чем в контрольной группе (табл. 2).

Результаты исследования подтвердили вклад полиморфизма 4a/b гена eNOS в развитие АГ у пациентов с РА восточносибирской популяции. Тем самым полученные результаты подтверждают основной предполагаемый механизм действия полиморфизма, связанного с дисфункцией эндотелия, недостаточным образованием NО, системным воспалением в сосудистой стенке, приводящим к развитию АГ у больных РА. В любом случае пациенты с длительным РА (более 2 лет) должны рассматриваться как пациенты высокого риска по развитию сердечно-сосудистых заболеваний (ССЗ), даже при отсутствии клинических признаков. Это требует обсуждения и уточнения как диагностических подходов, так и мероприятий по первичной профилактике ССЗ при РА.

Заключение

Таким образом, результаты исследования свидетельствуют о том, что гомозиготный генотип 4а/4a и аллель 4a полиморфизма 4a/4b гена eNOS являются предикторами развития РА в ассоциации с АГ. Полученные данные могут быть применимы для определения индивидуальной тактики ведения группы пациентов с РА в ассоциации с АГ. Важнейшими аспектами тактики ведения пациентов с РА и АГ являются решения о целесообразности и выборе медикаментозной терапии, для чего понадобится проведение проспективных исследований, которые позволят более точно определить особенности лечения АГ и преимущества различных классов антигипертензивных препаратов для профилактики сердечно-сосудистых осложнений у больных РА. Также не вызывает сомнений, что мультифакториальная природа АГ обусловлена полиморфизмами различных генов, участвующих в реализации различных молекулярных механизмов, что требует дальнейшего изучения для выявления генов, обладающих гипертензивным эффектом.

Сведения об авторах:

Чернова Анна Александровна — д.м.н., профессор ка­федры внутренних болезней № 1 ФГБОУ ВО КрасГМУ им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого Минздрава России; Россия, 660022, г. Красноярск, ул. Партизана Железняка, д. 1; ORCID iD 0000-0003-2977-1792.

Никулина Светлана Юрьевна — д.м.н., профессор, заве­дующая кафедрой внутренних болезней № 1 ФГБОУ ВО КрасГМУ им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого Минздрава России; Россия, 660022, г. Красноярск, ул. Партизана Железняка, д. 1; ORCID iD 0000-0002-6968-7627.

Толстокорова Юлия Александровна — клинический ор­динатор кафедры внутренних болезней № 1 ФГБОУ ВО КрасГМУ им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого Минздрава России; Россия, 660022, г. Красноярск, ул. Партизана Железняка, д. 1; ORCID iD 0000-0002-2261-0868.

Контактная информация: Толстокорова Юлия Алексан­дровна, e-mail: yuliyatolstokorova@mail.ru. Прозрачность финансовой деятельности: исследование проведено при финансировании ФГБОУ ВО КрасГМУ им. проф. Войно-
Ясенецкого Минздрава России (внутривузовский грант). Конфликт интересов отсутствует. Статья поступила 10.07.2020, поступила после рецензирования 23.07.2020, принята в печать 07.08.2020.

About the authors:

Anna A. Chernova — Dr. of Sci. (Med.), Professor of the Department of Internal Medicine No. 1 Krasnoyarsk State Medical University named after Prof. V.F. Voino-Yasenetsky; 1 ul. Partizana Zheleznyaka, Krasnoyarsk, Russian Federation, 660022; ORCID iD 0000-0003-2977-1792.

Svetlana Yu. Nikulina — Dr. of Sci. (Med.), Head of the Department of Internal Medicine No. 1 Krasnoyarsk State Medical University named after Prof. V.F. Voino-Yasenetsky; 1 ul. Partizana Zheleznyaka, Krasnoyarsk, Russian Federation, 660022; ORCID iD 0000-0002-6968-7627.

Yulia A. Tosltokorova — resident physician of the Department of Internal Medicine No. 1 Krasnoyarsk State Medical University named after Prof. V.F. Voino-Yasenetsky; 1 ul. Partizana Zheleznyaka, Krasnoyarsk, Russian Federation, 660022; ORCID iD 0000-0002-6968-7627.

Contact information: Yulia A. Tosltokorova, e-mail: yuliyatolstokorova@mail.ru. Financial Disclosure: The study was funded by Krasnoyarsk State Medical University named after Prof. V.F. Voino-Yasenetsky (intra-university grant). There is no conflict of interests. Received 10.07.2020, revised 23.07.2020, accepted 07.08.2020.