Рекомбинантный ангиогенин в составе уходовой косметики для борьбы с акне: проспективное интервенционное многоцентровое исследование | Флегонтова Е.А., Загртдинова Р.М., Бычкова Н.Ю., Сережникова Н.Б., Игрункова А.В.

Введение

Акне — одно из наиболее распространенных заболеваний кожи, характеризующееся образованием комедонов, папул и пустул, а в тяжелых случаях — узлов и кист. Ранее считали, что акне характерно для подростков и людей молодого возраста ввиду выраженных гормональных колебаний, однако за последнее время накопилась информация о заболеваемости людей среднего возраста [1]. Согласно исследованию А. Perkins et al. [2] клинически акне проявляется у 45% женщин в возрасте от 21 года до 30 лет, у 26% — от 31 года до 40 лет и у 12% — от 41 года до 50 лет. При этом воспалительные изменения преобладают у юных девушек, в то время как комедональная форма заболевания отмечается у пациенток старше 30 лет. В то же время в отечественных клинических рекомендациях указывается, что для позднего акне не характерна комедональная форма; чаще регистрируются немногочисленные папулезные элементы, преобладают воспалительные элементы, в том числе узлы, в большей степени поражается U-зона (щеки, нижняя часть подбородка, кожа вокруг рта)¹.

Патогенез акне достаточно хорошо изучен. Считают, что увеличение концентрации андрогенов и/или повышенная чувствительность рецепторов себоцитов к производным тестостерона приводят к их гиперпролиферации, гиперплазии и гиперсекреции сальных желез [3]. Это обусловливает формирование инфундибулярного гиперкератоза, клинически проявляющегося образованием комедонов. Повышенная секреция липидов себоцитами стимулирует размножение бактерий Cutibacterium acnes, продукты жизнедеятельности которых дополнительно повреждают кожу и действуют как хемоаттрактанты для лимфоцитов [4]. В результате возникает локальная гиперпродукция провоспалительных цитокинов (интерлейкин (ИЛ) 1β, ИЛ-8) и повреждение клеток с развитием спонгиоза. По мере прогрессирования дистрофических изменений, гибели клеток и увеличения концентраций провоспалительных факторов к области повреждения мигрируют нейтрофилы и макрофаги, которые резорбируют некротизированные ткани и выделяют вещества с повреждающим действием (активные формы кислорода, цитокины) [5, 6]. Таким образом, в основе патогенеза акне можно выделить 4 фактора:

• гипертрофия сальных желез;

• фолликулярный гиперкератоз;

• инфицирование;

• воспаление.

Лечение акне направлено на коррекцию именно этих факторов [3, 7].

Современные стратегии лечения предусматривают [6, 7]:

• применение уходовых средств в домашних условиях для борьбы с комедонами;

• использование ретиноидов и антибактериальных препаратов для борьбы с воспалением;

• гормональную терапию для коррекции эндокринологических нарушений и уменьшения секреции кожного сала.

Ангиогенин — секретируемая рибонуклеаза, которая стимулирует транскрипцию рРНК, ангиогенез, оказывает противовоспалительное действие [8–10]. В эксперименте продемонстрирован выраженный прорегенераторный потенциал ангиогенина [8, 11, 12]. Предпологается, что применение уходовой косметики с высоким содержанием ангиогенина будет способствовать уменьшению выраженности воспалительных и дистрофических изменений кожи, что благоприятно отразится на течении акне.

Цель исследования: определить эффекты и механизмы действия препаратов, содержащих регуляторный пептид ангиогенин у женщин 30–40 лет c поздним акне.

Материал и методы

Дизайн исследования

Проведено проспективное интервенционное многоцентровое неконтролируемое нерандомизированное исследование продолжительностью 3 мес.

В исследовании приняли участие 30 женщин в возрасте 30–40 лет с инволюционными изменениями кожи на фоне хронического акне. На первом визите был собран анамнез, проведены комплексная диа­гностика и панч-биопсия кожи (n=14). Участницам выдан набор косметики, предоставленный ООО «Лаборатория Ангиофарм» (г. Новосибирск, Россия). В набор для домашнего ухода входили: сыворотка с ниацинамидом, содержащая ангиогенин, крем с азелаиновой кислотой, а также крем-комфорт с полиненасыщенными жирными кислотами Омега 3-6-9. Все средства рекомендовали наносить на предварительно очищенную кожу лица, шеи и области декольте 2 р/сут в течение всего периода исследования (3 мес.), а применение сыворотки прервать за 3 сут до проведения игольчатой фракционной радиочастотной термостимуляции (RF) и не применять в течение 3 сут после нее.

Через 2 нед. пациентки с помощью анкетирования оценивали количество и выраженность высыпаний, общее состояние кожи (увлажненность, чувство стянутости); участницы и лечащий врач определяли состояние кожи по шкале Global Aesthetic Improvement Scale (GAIS); тон кожи, выраженность патологической пигментации, степень красноты, микрорельеф, глубину мелких морщин анализировали при дерматоскопии с цифровой обработкой на аппарате Antera 3D (Miravex, Ирландия).

Спустя 2 нед. от начала применения уходовой косметики 11 пациенткам провели фракционную термокоагуляцию дермы с помощью RF мощностью 526 Дж на 1,5 см2 на глубине 2 мм, нанося по всей поверхности лица и шеи 1 мл стерильного раствора ангиогенина (M.A.IN 1, ООО «Лаборатория Ангиофарм», Россия) за исключением зоны контроля. После высыхания препарата на кожу тонким слоем наносили регенерирующий гель с рекомбинантным ангиогенином. Всем участницам исследования рекомендовали использовать гель 2 р/сут на протяжении последующих двух недель наряду с уже используемыми средствами.

Через 1 мес. пациенток повторно осматривали, оценивали состояние кожи по шкале GAIS, проводили аппаратную диа­гностику и выполняли панч-биопсию (n=11) в зоне нанесения ангиогенина и зоне контроля. Через 3 мес. проводили итоговую диа­гностику состояния кожи и анкетирование всех участниц исследования.

Панч-биопсию выполняли в области нижнего полюса сосцевидного отростка, задней поверхности шеи и на границе роста волос с обеих сторон после предварительной анестезии кожи раствором артикаина для внутрикожного введения в объеме 1,2–1,5 мл панчем диаметром 2 мм, маркировали и передавали для морфологического анализа. Весь материал, полученный при панч-биопсиях за все время исследования, доставляли в лабораторию одномоментно, и патолог не имел доступа к информации о пациентах и сроках забора биоптатов (слепое исследование).

Критерии соответствия

Критерии включения в исследование: клинический диа-гноз комедональной формы хронического акне кожи лица в стадии ремиссии; наличие письменного информированного согласия на лечение, проведение исследования и публикацию его результатов.

Критерии невключения: беременность и период лактации, прием системных глюкокортикостероидов и цитостатиков как минимум за 3 мес. до начала исследования, хроническая сердечная недостаточность III–IV функционального класса, сахарный диабет, гематологические заболевания (нарушения свертывающей системы крови, анемия), системные заболевания, злокачественные новообразования, инфекции, отягощенный аллергологический анамнез, склонность к формированию гипертрофических и келоидных рубцов, неоправданные ожидания пациента.

Исследование прерывалось в случаях отказа пациентки от дальнейшего участия, индивидуальной непереносимости компонентов исследуемых препаратов, нарушения рекомендованного режима лечения или несоблюдения плана обследования.

Анализ результатов исследования

Для оценки результатов клинического исследования применяли:

• классификацию И.И. Кольгуненко для оценки типа возрастных изменений (1974 г.) [13];

• шкалу GAIS [14];

• программную диа­гностику методом аппаратной обработки дерматоскопии Antera 3D;

• анкету с 10-балльной аналоговой шкалой для само-оценки состояния кожи по следующим параметрам: количество и выраженность высыпаний, увлажненность, чувство стянутости, тургор.

Кроме того, участницам исследования предлагалось оценить консистенцию, текстуру, равномерность распределения, плотность при нанесении, скорость впитывания и смягчающее действие уходовой косметики по 10-балльной шкале.

Для проведения гистологического исследования образцы тканей фиксировали в нейтральном формалине, заливали в парафин, получали срезы толщиной 4 мкм, окрашивали гематоксилином и эозином («Биовитрум», Россия), орсеином («Биовитрум», Россия), пикросириусом красным (Abcam, США). Препараты изучали методами светлопольной, поляризационной и фазово-контрастной микроскопии в микроскопе Leica DM 4000 B LED (Leica Microsystems, Германия) с камерой Leica DFC 7000 (Leica Microsystems, Германия). В программе ImageJ (ImageJ v.1.52, США) на изображениях оценивали толщину эпидермиса, количество дистрофических эпителиальных клеток, число клеток воспаления в дерме.

Для иммуногистохимического исследования использовали первичные антитела к фактору роста эндотелия сосудов А (VEGF-A) (MAA143Hu24, Cloud-Clone Corp., China), ИЛ-1α (MAA071Hu22, Cloud-Clone Corp., China) и ИЛ-8 (MAA080Hu22, Cloud-Clone Corp., China). Срезы толщиной 4 мкм подготавливали стандартно. Результаты оценивали в пяти различных полях зрения при увеличении 400 полуколичественным методом согласно сумме баллов, выставленных по шкале, представленной в таблице 1 [15].

Этическая экспертиза

Исследование проводилось в соответствии с Хельсинкской декларацией «Этические принципы медицинских исследований с привлечением человека в качестве их субъекта» на основании разрешения локального этического комитета ФГБОУ ВО ИГМА Мин­здрава России (протокол № 764 от 24.10.2023).

Статистический анализ

Экспериментальные данные анализировали с использованием программного обеспечения GraphPad Prism 7.00 (GraphPad Software, США). Параметры, измеренные с помощью аппарата Antera 3D и программы ImageJ, сравнивали с помощью однофакторного анализа ANOVA с тестом множественного сравнения Тьюки. Для сравнения данных, полученных в результате применения шкал, использовали непараметрический критерий Краскела — Уоллиса с тестом множественного сравнения Данна. Различия считали статистически значимыми при значениях p≤0,05. Результаты статистического анализа представлены в виде гистограмм средних значений и ошибок среднего (параметрический критерий) или гистограмм медианных значений и интерквартильного интервала (непараметрический критерий).

Результаты исследования

Исходные клинические и гистологические характеристики кожи

На момент обращения за медицинской помощью кожа большинства пациенток характеризовалась наличием жирного блеска, расширенных пор, открытых и закрытых комедонов, особенно в области щек, носа и подбородка. Женщины акцентировали внимание врача на неровности рельефа и шелушении кожи, сложности в нанесении макияжа. У 10 пациенток определялись пигментные пятна в зоне хронического воспаления, у 6 — очаговая эритема, мелкие рубцовые изменения кожи в области щек.

По результатам гистологического исследования образцов кожи, полученных до начала применения предложенной косметики, у всех пациенток, которые согласились на забор панч-биоптатов, наблюдались дистрофические изменения эпидермиса: вакуольная дистрофия клеток, акантоз и атрофия. В 86% биоптатов архитектоника коллагеновых волокон дермы была обычной, однако в них отмечалось неравномерное распределение эластических волокон (n=6) и/или их деструкция (n=7). В двух образцах встретились очаги разрыхления коллагеновых волокон. Воспалительные изменения отмечались в 79% случаев. Они проявлялись слабой диффузной и выраженной периваскулярной лимфомакрофагальной инфильтрацией, в части биоптатов (n=3) иммунные клетки формировали очаговые скопления в дерме.

Результаты клинического исследования

Через 2 нед. применения уходовой косметики врач отметил значительное улучшение состояния кожи у 7 (23,3%) пациенток, а у 23 (76,7%) положительные изменения были заметны, но менее выражены. Пациентки оценивали состояние своей кожи по шкале GAIS: заметное улучшение отметили 5 (17%) участниц исследования, а 4 (13%) не увидели эффекта от применения косметики.

Через 1 мес. оценки состояния кожи врачом и пациентками практически не отличались: хорошо выраженный положительный эффект наблюдался у 20 (66,6%) и у 18 (60%) участниц исследования, по мнению врача и пациента соответственно. Остались полностью удовлетворены результатами 5 (16,6%) опрошенных пациенток, специалисты считали эффект достаточным у 4 (13,3%) участниц. По мнению одной пациентки, состояние кожи ухудшилось после процедуры игольчатой RF: специалистом оно было оценено как «нет изменений, состояние такое же, как и до процедуры» (0 баллов), в то время как участница отметила, что «состояние хуже, чем до процедуры» (-1 балл).

Через 3 мес. от начала исследования были полностью удовлетворены состоянием кожи 12 (40%) пациенток. Значительное улучшение и необходимость в продолжении корректирующих процедур отмечали 15 (50%) участниц, по мнению врача, данная тактика лечения была бы оптимальной для 14 (46%) пациенток.

На фоне применения уходовой косметики 21 (70%) пациентка отметила, что кожа становится увлажненной, улучшается ее тургор, 18 (60%) заявили об исчезновении стянутости и неприятных ощущений, более половины (19 (63,3%)) указали на отсутствие побочных эффектов. О быстром исчезновении высыпаний и их следов свидетельствовала 21 (70%) пациентка; 12 (40%) участниц с пост-воспалительными элементами на щеках и шее отметили значительное уменьшение их числа и размера при применении азелаинового крема. Косметика очень понравилась 21 (70%) участнице исследования из 30, столько же пациенток отметили, что эффект увлажнения держится весь день.

После применения геля для умывания с аминокислотами шелка чувство комфорта и чистоты отметили 7 (23,3%) пациенток, изредка возникающее чувство стянутости было у 3 (10%) человек. По окончании исследования по 4 (13,3%) участницы отметили сохранение черных точек и признаков воспаления. Практически исчезло шелушение у 26 (86,7%) женщин, сухость перестала беспокоить полностью 18 (60%) участниц и стала появляться только после умывания водой и перепадов температуры у 5 (16,6%) пациенток.

После RF с трансдермальной доставкой стерильного раствора ангиогенина 8 женщин из 11 указали на более свежий и молодой вид кожи, 9 отметили уменьшение угревых высыпаний и выравнивание рельефа кожи лица, 10 — повышение ее упругости. У большинства (n=7) участниц эффект от применения крема Омега 3-6-9 после игольчатой RF стал еще более выраженным. Также положительными эффектами участницы исследования сочли улучшение питания и увлажнение кожи, повышение устойчивости к погодным условиям, уменьшение пигментации и шелушения. Кроме того, декоративная косметика стала держаться в течение всего дня.

По результатам дерматоскопии на аппарате Antera 3D у большинства участниц уменьшалась выраженность покраснения кожи и пигментации, выравнивался микрорельеф кожи. У всех (n=30) обследованных через 2 нед. использования уходовой косметики отмечено очищение пор; у 54% они оставались открытыми, преимущественно в области щек; у остальных имели тенденцию к сужению. Через 3 мес. от начала исследования объем пор уменьшился относительно исходного состояния у 81% участниц.

Результаты гистологического исследования

После применения уходовой косметики в течение 2 нед. атрофия эпидермиса отсутствовала в 9 образцах, в 5 образцах уменьшалась выраженность акантоза и вакуольной дистрофии. Абсолютное число дистрофически измененных клеток было достоверно меньше, чем в начале исследования (118±40 и 198±76 соответственно, p<0,0001) (рис. 1).

В ряде случаев (n=6) структура дермы была обычной; в других отмечалось ее уплотнение, формирование участков фиброзирования вокруг сальных желез и волосяных фолликулов (рис. 2). В двух образцах встретились участки разрыхления коллагеновых волокон. Во всех образцах сохранялась слабая или умеренная периваскулярная воспалительная инфильтрация, однако очаговая инфильтрация отсутствовала. Сосуды в шести случаях были не изменены, в остальных отмечался периваскулярный фиброз.

Через 1 мес. от начала исследования в большинстве образцов (n=7) почти полностью отсутствовала вакуольная дистрофия, был слабо выражен акантоз эпидермиса, атрофия не определялась во всех образцах (p=0,0001), воспалительная инфильтрация была минимальной (см. рис. 1, рис. 3). В 7 из 11 образцов архитектоника коллагеновых волокон дермы оказалась нормальной, в одном образце коллагеновые волокна были уплотнены, еще в одном были обнаружены очаги разрыхления. После процедуры RF и применения косметики с ангиогенином в течение 1 мес. при статистическом анализе выявлено увеличение содержания эластических волокон относительно данных, полученных в более ранние сроки (p<0,09) (см. рис. 1).

По данным иммуногистохимического анализа через 2 нед. от начала применения уходовой косметики экспрессия ИЛ-1α в кератиноцитах снижалась на 20%, a ИЛ-8 — на 33%. Этот эффект сохранялся на фоне применения предложенных косметических средств, а для ИЛ-8 нарастал после игольчатой RF (p<0,001) (рис. 4). При статистическом анализе экспрессии VEGF-A мы не получили достоверных различий между образцами кожи из зоны использования уходовой косметики и контрольных участков. Тем не менее до начала применения уходовой косметики у большинства участниц число VEGF-A-позитивных клеток было несколько выше нормы и маркер экспрессировался, помимо клеток эндотелия сосудов, также кератиноцитами и дермальными фибробластами. Однако уже после двух недель ежедневного использования уходовых средств у некоторых пациентов экспрессия VEGF-A снизилась, а после игольчатой RF с трансдермальной доставкой рекомбинантного ангиогенина она выявлялась только в клетках эндотелия.

Обсуждение

Применение уходовой косметики в домашних условиях с соблюдением рекомендаций через 14 дней способствовало регрессу воспалительного процесса, исчезновению высыпаний и следов от них у большинства участниц исследования; все женщины заметили повышение степени увлажненности и тургора кожи.

Сыворотка с ниацинамидом оказала положительное действие. Уменьшилась выраженность покраснений, раздражение кожи купировалось за счет редукции воспалительных изменений и улучшения кровоснабжения дермы под действием рекомбинантного ангиогенина и тетрапептида 33. Ангиогенин — естественный стимулятор роста капилляров, который за счет улучшения кровоснабжения и питания соединительной ткани увеличивает активность фибробластов и ускоряет естественный процесс обновления клеток, а тетрапептид 33 блокирует выработку воспалительных цитокинов [8, 12]. Эти данные подтверждаются результатами иммуногистохимического анализа, который показал достоверное снижение уровня экспрессии ИЛ-1α и ИЛ-8.

Активация Cutibacterium acnes и выделение воспалительных медиаторов инициируют местный иммунный ответ, опосредованный ИЛ-1α, что способствует уплотнению и слипанию корнеоцитов с образованием пленки. Эта пленка препятствует выделению секрета сальных желез и усугубляет фолликулярный гиперкератоз. Кроме того, активация Toll-like рецепторов 2 приводит к увеличению выработки провоспалительных цитокинов ИЛ-12 и ИЛ-8, которые обусловливают деструкцию фолликулярного эпителия, активацию процессов окисления и усиливают воспаление [16]. ИЛ-8 — хемокин, который играет важную роль в поддержании гиперплазии эпидермиса и фолликулярного гиперкератозa у пациентов с акне [17].

Крем, содержащий 20% азелаиновой кислоты, оказывает бактерицидное и противовоспалительное действие, регулирует работу сальных желез, уменьшает гиперкератоз [18]. Средство дает видимый результат при коррекции эпидермальной и смешанной форм гиперпигментации благодаря подавляющему воздействию на пролиферацию меланоцитов [19]. Сок алоэ вера в составе продукта обладает противовоспалительными свойствами, смягчаeт и увлажняет кожу. Полисахариды растительного происхождения усиливают врожденный иммунитет, оказывают увлажняющее действие в течение длительного времени, уменьшают чувствительность и восстанавливают микробиом кожи. Данные эффекты способствуют нормализации иммунного статуса кожи пациентов с акне, у которых, как известно, обычно наблюдается дисфункция иммунитета с преимущественной активацией Т-звена [20]. Бентонитовая глина обладает сорбирующим и себорегулирующим действием, очищает поры, осветляет и тонизирует кожу.

Крем-комфорт Омега 3-6-9 оказывает антиоксидантный эффект, нормализуя pH, поддерживает водный баланс кожи, способствует выработке коллагена и повышает сопротивляемость ультрафиолету [21, 22]. Последний эффект крайне важен для комплексного ухода за комедональной формой акне, поскольку известно, что воздействие ультрафиолетовых лучей спектра А и В способствует гиперплазии сальных желез, гиперкератинизации, стимулирует секрецию кожного сала и комедонообразование [20]. Улучшение гидролипидного баланса эпидермиса также способствует поддержанию метаболического статуса кожи и снижает выраженность возрастных изменений. Результаты гистологического исследования доказали снижение выраженности дистрофических изменений кожи.

Cимптомокомплекс постакне беспокоит пациенток не меньше, чем активные проявления дерматоза. Он включает такие нарушения, как гиперпигментация, атеромы, милиумы и патологические рубцы. Фракционный термолиз — один из наиболее действенных подходов для коррекции данного синдрома: в коже формируются микрозоны асептического воспаления, приводящего к ремоделированию дермы [23]. Рекомбинантный ангио-генин может усилить эти эффекты, он доказал свою эффективность в стимуляции регенерации и улучшении местного кровоснабжения тканей [8, 12, 24, 25]. Тем не менее диффузионная способность этого белка весьма ограниченна за счет высокой молекулярной массы (около14,5 кДа), именно поэтому его нанесение после процедуры игольчатой RF является перспективной стратегией по улучшению доставки вещества в глубокие слои дермы [26].

Комбинация компонентов регенерирующего геля, применявшегося после аппаратного воздействия и нанесения стерильного ангиогенина, оказывает высокоспе­ци­фическое влияние на восстановление местного кровоснабжения, улучшает трофику, создает благоприятные условия для ускоренной регенерации тканей. Он содержит 2 основных компонента: рекомбинантный ангиогенин и натуральный водный экстракт из меристематических клеток корней дуба. Ангиогенин участвует в реконструкции капиллярной сети, активации синтетической активности фибробластов и синтезе коллагена, стимулирует регенерацию в целом, а используемый экстракт снижает отек и воспаление, уменьшает болевой синдром, оказывает местное иммуномодулирующее действие [8, 12].

Фактор роста, активирующий рецепторы на эндотелиальных клетках и стимулирующий ангиогенез (VEGF-A), в нормальных условиях экспрессируется в коже очень слабо и только в эндотелии сосудов, но при развитии патологических изменений кератиноциты и фибробласты также начинают экспрессировать этот фактор, что способствует миграции макрофагов и увеличивает проницаемость капилляров [27]. В нашем исследовании мы не получили статистически значимых различий по уровню экспрессии VEGF-A на исследуемых и контрольных участках, однако отметили нормализацию его распределения в клетках — локализацию его только в эндотелиоцитах. Это свидетельствует об улучшениях микросреды дермы.

Таким образом, благоприятное влияние на состояние кожи, отмеченное участниками исследования, обеспечивалось комплексным составом косметических средств, который включал в себя натуральные компоненты, воздействующие на все звенья патогенеза акне.

Заключение

Акне, оставаясь актуальной проблемой дерматологии и косметологии, требует тщательного подхода к подбору лечения и назначению комплексного ухода, бережно и эффективно воздействующего на основные звенья патогенеза заболевания. Комплексная терапия уходовой косметикой в сочетании с игольчатой RF и трансдермальной доставкой ангиогенинa оказывает благоприятное воздействие на состояние кожи пациентов с акне, уменьшая выраженность возрастных и воспалительных изменений кожи, способствуя поддержанию ее здорового вида, нормализуя влажность, тургор тканей и секреторную активность сальных желез. Кроме клинического эффекта, улучшается гистологическая структура кожи за счет нормализации состояния клеток эпидермиса, сосудов, архитектоники коллагеновых и эластических волокон дермы, минимизации воспалительной инфильтрации.

Таким образом, применение косметики, содержащей ангиогенин, рекомендуется для ежедневного ухода, в том числе пациентам с хроническим акне. Для более интенсивной коррекции проблемной кожи и возрастных изменений рекомендуется сочетать уходовую косметику с игольчатой RF и трансдермальной доставкой ангиогенина.

¹Федеральные клинические рекомендации по ведению больных акне. 2015. (Электронный ресурс.) URL: https://www.rodv.ru/upload/iblock/e74/e74c488d017cd6029c87c4b38753a7bf.docx (дата обращения: 15.04.2024).