Гипоксическое повреждение и неоваскуляризация эндометрия при гиперплазии слизистой оболочки матки | Казачкова Э.А., Казачков Е.Л., Затворницкая А.В., Воропаева Е.Е.

Введение

Каждый год в Российской Федерации неуклонно растет число больных, страдающих аденокарциномой эндометрия [1]. В качестве ее предшественника нередко выступает гиперплазия эндометрия (ГЭ) [2]. Хронический эндометрит (ХЭ), с которым зачастую сочетается ГЭ, способствует реализации ряда факторов, которые играют роль в развитии гиперплазии слизистой оболочки матки: гиперэстрогенизм, нарушение рецептивности эндометрия, неадекватная реакция клеток эндометрия на внешние воздействия [3–5]. Общей характеристикой всех вышеперечисленных процессов, приводящих к трансформации клеток, является гипоксия [6]. Внутриклеточная гипоксия существенно ухудшает прогноз заболевания посредством стабилизации транскрипционного фактора гипоксии HIF-1α (hypoxia-inducible factor) [7]. Стабилизация HIF-1α способствует адаптации клеток в условиях гипоксии посредством усиления пролиферации клеток, неоваскуляризации, антиапоптоза [6, 8, 9]. Однако процессы гипоксического повреждения и неоваскуляризации эндометрия при его гиперплазии остаются малоизученными.

Цель исследования: cравнительная оценка гипоксического повреждения и неоваскуляризации эндометрия при его гиперплазии.

Материал и методы

Исследование проводили на кафедрах акушерства и гинекологии, патологической анатомии и судебной медицины ФГБОУ ВО ЮУГМУ Минздрава России (Челябинск). В исследование вошли 100 пациенток: I группу составили 30 пациенток, у которых при гистологическом изучении биоптатов эндометрия выявлена ГЭ без атипии, сочетающаяся с ХЭ; II группу — 30 пациенток с ГЭ без атипии; III группу — 20 пациенток с ХЭ; IV группу (контрольную) — 20 соматически и гинекологически здоровых женщин, обратившихся по вопросам планирования беременности, гистологическое исследование биоптатов эндометрия которых выявило нормальную слизистую оболочку матки.

Критерии включения: информированное согласие на участие в исследовании, репродуктивный возраст (15–49 лет), нормальный овуляторный менструальный цикл (для I, III, IV групп).

Критерии исключения: овуляторная дисфункция (для I, III, IV групп), миома матки, требующая хирургического лечения, аденомиоз, атипическая ГЭ, злокачественные опухоли.

Средний возраст пациенток I группы составил 37,6 (4,1) года, II — 35,6 (2,8) года, III — 34,2 (1,5) года, IV — 33,85 (0,7) года (p=0,06).

Исследование имеет дизайн одномоментного нерандомизированного ретроспективного с использованием гистологических, иммуногистохимических, статистических методов.

Эндометрий для исследования получали на 18–22-й день менструального цикла с использованием мануальной вакуумной аспирации под контролем гистероскопии (в I и II группах) или путем пайпель-биопсии (в III и IV группах).

Проводили комплексное морфологическое исследование образцов слизистой оболочки матки, интерпретируя морфологическую картину по общепринятым критериям [10, 11]. Гистологические препараты готовили с использованием стандартных методик. После депарафинизации срезы окрашивали гематоксилином и эозином, пикрофуксином по ван Гизону. Для обнаружения плазматических клеток использовали мышиные моноклональные антитела (МКАТ) CD138 / syndecan-1 (clon B-A38, r.t.u., Cell Marque Sigma — Aldrickcompany, США). Степень выраженности ХЭ оценивали в соответствии с критериями, предложенными Э.А. Казачковой и соавт. [12] и Г.Х. Толибовой и соавт. [13] (для оценки уровня CD138). Степень активности ХЭ определяли по критериям полуколичественной морфологической оценки воспалительного процесса при ХЭ, предложенным О.А. Алимовой и соавт. [14]. Воспалительный процесс считали неактивным, если при ХЭ нейтрофильные гранулоциты в полиморфноклеточном воспалительном инфильтрате были единичными либо отсутствовали.

Для оценки наличия гипоксического повреждения в образцах эндометрия определяли уровень экспрессии HIF в слизистой оболочке матки с помощью моноклональных антител к HIF-1α (клон EP118, Epitomics Ink., США). Для верификации сосудистого эндотелия использовали моноклональные мышиные антитела к CD34 Сlass II (клон QBEnd10, Dako, Дания).

Иммуногистохимическое исследование было основано на оценке наличия, интенсивности и распределения коричневого окрашивания ядер пораженных клеток. Определяли процент иммунопозитивно окрашенных ядер клеток не менее чем в 1000 клетках в 10 полях зрения. При отсутствии иммунопозитивно окрашенных клеток в отношении HIF-1α и CD34 экспрессия считалась негативной. При слабой экспрессии фиксировали редкие иммунопозитивные клетки с коричневым окрашиванием ядер; при умеренной форме — немногочисленные скопления клеток с ядрами, окрашенными в коричневый цвет. Выраженную форму экспрессии устанавливали при верификации клеток с коричневыми ядрами по всей толще эндометрия. Для объективизации анализа экспрессии в отношении HIF-1α и CD34 использовали компьютерный морфометрический анализатор изображений «Видеотест-Морфология 5.2» (Россия).

Статистический анализ выполнен с использованием статистического пакета Statistica 10 фирмы StatSoft. Для анализа количественных показателей определяли соответствие закону нормального распределения с использованием критерия Колмогорова — Смирнова. В случае нормального распределения количественных показателей использовали среднее арифметическое (М) и стандартное отклонение (SD). При отличии показателей от нормального распределения рассчитывали медиану (Ме) и квартили Q1 и Q3 в формате Ме (Q1; Q3). Качественные показатели определяли в абсолютных и относительных (%) величинах.

Для оценки количественных показателей применяли критерий Краскела — Уоллиса. Для сравнения качественных показателей использовали критерий хи-квадрат с поправкой Йетса. При интерпретации результатов статистического анализа величина уровня значимости (р), равная 0,05, принята за критическую.

Результаты исследования

При гистологическом исследовании биоптатов эндометрия в I группе регистрировали ГЭ без атипии в сочетании с ХЭ различной степени выраженности и низкой степени активности. При анализе характера экспрессии HIF-1α в эндометрии пациенток I группы выраженную форму экспрессии выявляли в каждом втором (53,3%) образце, умеренную — в каждом третьем (33,3%), слабую — в 3 (10%) образцах, 1 (3,3%) образец был негативен в отношении HIF-1α. Средняя площадь иммунопозитивных структур составила 41,7% (35,8%; 47,1%). При оценке экспрессии CD34 в образцах эндометрия пациенток I группы преобладала выраженная форма экспрессии (16 образцов, 53,3%) по сравнению с умеренной и слабой формами (10 и 4 образцов, 33,3 и 13,3% соответственно). Средняя площадь иммунопозитивных структур равнялась 38,6% (32,4%; 44,5%).

Во II группе отмечали картину ГЭ без атипии, кроме того, регистрировали проявления реактивного неактивного воспаления эндометрия: при отсутствии плазмоцитов обнаруживали немногочисленные диффузно расположенные нейтрофильные гранулоциты, лимфоциты, мелкие скопления фибробластов. При оценке уровня экспрессии HIF-1α в эндометрии пациенток II группы выраженную форму экспрессии выявляли в 10 (33,3%) образцах, умеренную — в большинстве случаев (13 образцов, 43,3%), слабую — в 5 (16,7%) образцах, в 2 (6,7%) случаях экспрессия HIF-1α не регистрировалась. Средняя площадь иммунопозитивных структур составила 32,6% (28,1%; 37,1%). При анализе экспрессии CD34 в 9 (30%) образцах отмечали выраженную форму экспрессии, статистически значимо чаще фиксировали умеренную форму (17 образцов, 56,7%), слабую — регистрировали в 4 (13,3%) случаях. Средняя площадь иммунопозитивных структур составила 32,4% (27,6%; 36,2%).

В III группе наблюдали картину ХЭ умеренной степени выраженности и низкой степени активности. При оценке экспрессии HIF-1α в эндометрии пациенток этой группы выраженную форму экспрессии не регистрировали, в 7 (35%) образцах выявляли умеренную форму, в 11 (55%) — слабую, 2 (10%) образца были негативны. Средняя площадь иммунопозитивных структур составила 12,3% (4,1%; 21,2%). При анализе экспрессии CD34 выраженную форму экспрессии отмечали в 4 (20%) образцах, умеренную форму — в 6 (30%) случаях, абсолютное большинство образцов характеризовались слабой экспрессией в отношении CD34 (12 случаев, 60%). Средняя площадь иммунопозитивных структур составила 18,4% (14,6%; 22,1%).

Слизистая оболочка матки женщин контрольной группы соответствовала средней стадии фазы секреции. При анализе экспрессии HIF-1α в этой группе HIF-позитивные клетки обнаружены не были. Средняя площадь иммунопозитивных структур составила 0%. При оценке экспрессии CD34 выраженную форму экспрессии отметили лишь в 2 (10%) образцах, умеренную — в 4 (20%), слабая форма экспрессии преобладала, ее регистрировали в 14 (70%) случаях. Средняя площадь иммунопозитивных структур составила 6,7% (4,3%; 9,1%).

Таким образом, анализ экспрессии HIF-1α и CD34 показал, что в группе пациенток с ГЭ, сочетающейся с ХЭ, статистически значимо чаще регистрировали выраженную форму экспрессии в отношении как HIF-1α (р=0,03), так и CD34 (р=0,45) по сравнению с группой с ГЭ, где преобладала умеренная форма экспрессии HIF-1α и CD34, и группой с ХЭ, где в большинстве случаев отмечали слабую форму экспрессии HIF-1α и CD34. В группе контроля HIF-позитивные клетки не регистрировались, а экспрессия CD34 в абсолютном большинстве образцов эндометрия
соответствовала слабой.

Заключение

Статистически значимое увеличение экспрессии HIF-1α в образцах слизистой оболочки матки при сочетании ГЭ и ХЭ свидетельствует о более выраженном гипоксическом повреждении эндометрия в сравнении с таковым при изолированных ГЭ и ХЭ. Статистически значимое повышение экспрессии CD34 при сочетанной патологии отражает закономерную усиленную неоваскуляризацию эндометрия. Полученные данные могут стать платформой для разработки персонифицированного подхода к терапии ГЭ, сочетающейся с ХЭ, с использованием ингибиторов HIF-1α, а также препаратов, обладающих антиоксидантной активностью.

Сведения об авторах:

Казачкова Элла Алексеевна — д.м.н., профессор, профессор кафедры акушерства и гинекологии, ORCID iD 0000-0002-1175-4479;

Казачков Евгений Леонидович — д.м.н., профессор, зав. кафедрой патологической анатомии и судебной медицины, ORCID iD 0000-0002-2008-7671;

Воропаева Екатерина Евгеньевна — д.м.н., доцент, профессор кафедры патологической анатомии и судебной медицины, ORCID iD 0000-0003-0800-3380;

Затворницкая Александра Вадимовна — аспирант кафедры акушерства и гинекологии, ORCID iD 0000-0002-9245-3749.

ФГБОУ ВО ЮУГМУ Минздрава России. 454092, Россия, Челябинск, ул. Воровского, д. 64.

Контактная информация: Затворницкая Александра Вадимовна, e-mail: monostyle@list.ru. Прозрачность финансовой деятельности: исследование выполнено при поддержке ООО «ИНВИТРО-Урал». Конфликт интересов отсутствует. Статья поступила 08.07.2019.

About the authors:

Ella A. Kazachkova — MD, PhD, Professor, Professor of the Department of Obstetrics and Gynecology, ORCID iD 0000-0002-1175-4479;

Evgeniy L. Kazachkov — MD, PhD, Professor, Head of the Department of Pathologic Anatomy and Forensic Medicine,
ORCID iD 0000-0002-2008-7671;

Ekaterina E. Voropaeva — MD, PhD, Associate Professor, Professor of the Department of Pathologic Anatomy and Forensic Medicine, ORCID iD 0000-0003-0800-3380;

Aleksandra V. Zatvornitskaya — MD, postgraduate student of the Department of Obstetrics and Gynecology, ORCID
iD 0000-0002-9245-3749.

South Ural State Medical University. 64, Vorovskogo str., Chelyabinsk, 454092, Russian Federation.

Contact information: Aleksandra V. Zatvornitskaya, e-mail: monostyle@list.ru.

Financial Disclosure: the study is supported by LLC “INVITRO-Ural». There is no conflict of interests. Received 08.07.2019.